PCR技術(shù)的定量原理:
擴增曲線
在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點:
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Stachybotrys spp. |
貨號 | YSP97202 |
?
熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點:
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點:
成本高;
設(shè)計難度大;
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
K-酰轉(zhuǎn)移酶2B(KAT2B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金龜子綠僵菌 5g
K-酰轉(zhuǎn)移酶5(KAT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 稍黃鏈霉菌 1g
N-酰轉(zhuǎn)移酶1(NAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 戊糖乳桿菌 5g
N-酰轉(zhuǎn)移酶2(NAT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 枯草芽孢桿菌 100ml
N-酰轉(zhuǎn)移酶5(NAT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 卡利比克畢赤酵母 25ml
N-酰轉(zhuǎn)移酶6(NAT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 長根菇 1g
鈣同線蛋白3(CLSTN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 榨菜檸檬球菌 100g
鈣同線蛋白1(CLSTN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 粘紅酵母 25g
基質(zhì)抗原3(STAG3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 天藍色鏈霉菌* 25g
基質(zhì)抗原2(STAG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 草酸鹽貪銅菌 5g
基質(zhì)抗原1(STAG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 梭菌 25g
二甲基甘氨酸脫氫酶(DMGDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 生金鏈霉菌 5g
酯酶D(ESD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 硝孢鏈霉菌 100g
外生骨疣蛋白1(EXT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 雜色曲霉原變種 25g
外生骨疣蛋白2(EXT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 500g
羥酰谷胱甘肽水解酶(HAGH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 多根硬皮馬勃 100g
溶血脂酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPGAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 米氏假單胞菌 25g
N-酰葡糖胺激酶(NAGK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大豆慢生根瘤菌 5g
葡萄狀穗霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒上皮分泌型FAM3C蛋白抗體PEDF (pigment epithelium-derived factor) 色素上皮源性因子(多肽抗原)100 ul
FAM36A蛋白抗體PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 脂酸酸酶2C(抗原)20 ul
FAM50A蛋白抗體PEPT1 (Peptide-transporrs 1) 腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白(小肽轉(zhuǎn)運蛋白)多肽100 ul
FAM134C蛋白抗體PN/MMAC1 一種腫瘤抑制基因抗原100 ul
凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體PIBF(progesrone induced blocking factor) 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子(抗原)100 ul
型肝炎病毒X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體PIWIL1(piwi-like 1) piwi 樣1蛋白(抗原)20 ul
卵泡抑素相關(guān)蛋白5抗體PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activad receptor-gamma) 過氧化酶活化增生受體γ(抗原)100 ul
叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C2抗體PP2Ac 蛋白酸酶4(抗原)100 ul
Fbx15蛋白抗體Runx3 一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因(抗原)100 ul














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